海棠茶对乌头中毒的影响研究

写作帮手 1本页 4339字

摘 要

  目的:通过体内外实验,观察海棠茶对乌头中毒的解救作用,以期为海棠茶的合理利用提供科学依据,以及为乌头类中毒的防治提供方法。

  方法:

  1. 观察海棠茶对乌头急性毒性的影响:测定乌头水提物的 LD50;预先给予海棠茶水提物,分组给药,观察记录中毒行为及死亡率,探究海棠水提物对乌头急性中毒小鼠行为、生理生化指标变化以及对代谢的影响。

  2. 探究湖北海棠对乌头中毒的心脏毒性影响:观察海棠茶对乌头急性中毒大鼠心电图的影响。培养 H9c2 大鼠心肌细胞,观察海棠茶对乌头碱损伤心肌细胞的影响,检测细胞液中乌头碱的含量;MTT 法测定湖北海棠对乌头作用的 H9c2 细胞的增值抑制作用;微板法测定心肌细胞乳酸脱氢酶含量和心肌酶量的变化。

  结果:

  1. 乌头水提物的 LD50=62.10mg/kg,海棠水提物(600 mg/kg)能显着降低乌头水提物(60mg/kg)的毒性作用;预先给予海棠水提物,海棠水提物中剂量组(600mg/kg)能使乌头(60mg/kg)中毒的死亡率从 50%降到 20%;乌头碱血药浓度降到 30.2%。

  2. 海棠水提物能使大鼠心率失常明显改善,能逆转 Q 波及ST-T 等心肌缺血心电图的改变,改善心率失常。实验各细胞液中乌头碱的含量无明显差异,均保持在0.02mg/mL 左右;400μg/ml 乌头碱对 H9c2 细胞的抑制率为 30.78% ,乳酸脱氢酶含量为12.50 U/L,海棠水提物能明显乌头碱对心肌细胞损伤,海棠低、中、高剂量组的抑制率分别降至 24.61%、15.88%、15.28%,乳酸脱氢酶的含量分别为 8.73 U/L、7.63 U/L、7.56 U/L。

  体内实验显示海棠水提物能明显降低乌头对内肌的毒性。乌头中毒后致使小鼠肌酸激酶活力升高至2.44 U/mL,海棠低、中、高剂量组肌酸激酶分别降至1.82U/mL、1.73U/mL、1.59 U/mL。

  结论:

  1. 海棠水提物能缓解乌头中毒。海棠水提物能降低乌头中有毒物质乌头碱的血药浓度,保护乌头中毒的靶器官。可用于防治乌头中毒。

  2. 海棠水提物对心肌具有保护作用。海棠水提物能降低乌头中有毒物质乌头碱对心肌细胞的损伤,改善心率失常等症状。其作用与抗氧化损伤、抑制脂质过氧化有关,可用于对心血管保护。

  关键词:湖北海棠;乌头;水提物;毒性;心脏 

Abstract 

  Objective: To observe the rescue effect of hupehensis on Aconitum poisoning in vivoand in vitro, in order to provide scientific basis for rational utilization of hupehensis andprovide methods for prevention and treatment of Aconitum poisoning.

  Method:

  1. To observe the effect of hupehensis on acute toxicity of Aconitum: determine theLD 50 of water extract of Aconitum, give the water extract of hupehensis in groups, andobserve the poisoning behavior and death rate by grouping.

  2. To explore the effect of hupehensis on the cardiotoxicity of Aconitum poisoning:To observe the effect of hupehensis on the electrocardiogram of rats with acute Aconitumpoisoning. H9c2 rat cardiac myocytes were cultured, the effects of hupehensis on aconitineinduced myocardial cells were observed, the content of aconitine in cell fluid was detected,and the increment inhibitory effect of hupehensis on H9c2 cells of Aconitum wasdetermined by MTT. Changes of lactate dehydrogenase and myocardial enzymes weremeasured by microplate method.

  Result:

  1. The LD 50 =62.10mg/kg of water extract of Aconitum and mg/kg (600 mg/kg)could significantly reduce the toxic effect of Aconitum extract (60mg/kg). In advance, thewater extract of hupehensis (water extract) could reduce the mortality from 50% to 20%,and the blood concentration of aconitine was reduced to 30.2%.

  2. The water extract of hupehensis can significantly improve the arrhythmia of rats,reverse the change of electrocardiogram of Q and ST-T and improve the arrhythmia. Thereis no significant difference in the content of aconitine in each cell liquid, and the retentionrate is about 0.02mg/mL; the inhibition rate of 400 aconitine g/ml on H9c2 cells is 30.78%,and the content of lactate dehydrogenase is 12.50 U/L. The water extract of hupehensis canobviously damage the cardiac muscle cells. The inhibition rates of low, medium and highdose groups of the Chinese flowering crabapple were reduced to 24.61%, 15.88% and 15.28%respectively, and the contents of lactate dehydrogenase were 8.73 U/L, 7.63 U/L, 7.56 U/L.respectively.

  In vivo experiments showed that the water extract of hupehensis could significantlyreduce the toxicity of Aconitum on the internal muscles. After the Aconitum poisoning, thecreatine kinase activity in mice increased to 2.44 U/mL, and the creatine kinase in the low,medium and high dose groups of Begonia decreased to 1.82U/mL, 1.73U/mL and 1.59U/mL. respectively.

  Conclusion:

  1. The water extract of hupehensis can relieve Aconitum poisoning. The water extractof hupehensis can reduce the blood concentration of aconitine in the Aconitum and protectthe target organs of Aconitum poisoning. It can be used to control Aconitum poisoning.

  2. The water extract of hupehensis can protect the myocardium. The water extract ofhupehensis can reduce the damage of aconitine to myocardial cells and improve thesymptoms such as arrhythmia. Its role is related to anti-oxidative damage and inhibition oflipid peroxidation, and can be used for cardiovascular protection..

  Key words: hupehensis;aconitum;water extract;toxicity;heart 

海棠茶

目 录 

  英文缩略词表

  引 言 

  1 海棠茶对乌头急性毒性的影响 

  1.1 乌头的急性毒性实验 

  1.2 海棠茶减轻乌头的急性毒性 

  1.3 统计学分析 

  1.4 实验结果 

  2 海棠水提物对乌头碱心脏毒性的影响 

  2.1 H9C2 细胞的培养 

  2.2 海棠水提物直接影响乌头碱等有毒物质 

  2.3 海棠水提物减轻乌头水提物对 H9C2 细胞增殖的抑制 

  2.4 统计学方法分析 

  2.5 实验结果 

  3 海棠水提物的减毒机制研究 

  3.1 海棠水提物减轻乌头碱对 H9C2 细胞膜的伤害及氧化损伤 

  3.2 统计学方法分析 

  3.3 实验结果 

  4 结论 

  5 讨论 

  5.1 海棠茶有助于乌头类中药的减毒 

  5.2 海棠茶有助于乌头类中药的增效 

  5.3 海棠茶对乌头类中药减毒增效机制 

  5.4 海棠茶在心血管疾病方面的应用前景 

  6 课题创新点 

  参考文献

  致 谢 

  综 述 

  参考文献


英文缩略词表

英文缩略词表

引 言 

  乌头属植物在我国药用历史已非常悠久,已有 2000 多年的历史,因来源和药用部位不一样,分别有川鸟、草乌、附子等不同药名,统称为乌头类中药[1]。《中国药典》2015 年版收录的乌头类中药包括有川乌、制川乌、草乌、制草乌、草乌叶和附子,其中,川乌为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根,附子为毛茛科植物乌头的子根,草乌为毛茛科植物北乌头 Aconitumkusnezoffii Reichb.的干燥块根[2-3]。以上这些品种都被国家归为毒性药品进行严格管理,因此不管是在临床实验还是日常使用中,都应先找到医生对症状及需要开设处方,并应邀专业人士对药品的使用做出相应的调配。乌头具有祛风、除湿,散寒,止痛等功效[4]。附子具有回阳救逆、散寒逐湿、温中止痛之功,具有“百药之长”、“回阳救逆第一品药”之称谓。现代药理学理论,乌头类中药具有止痛、抗炎、麻醉、调节免疫、抗癌、抑制血管通透性以及降低血压等多种作用,被广泛用于治疗风湿关节痛、胃肠炎、水肿、支气管哮喘、各种肿瘤以及某些内分泌紊乱多种疾病[5]。附子回阳救逆,对救治冠心病、心绞痛、急性心肌梗死所致的休克、心力衰竭等效果良好。由于乌头类中药药效显着,尤其是对多种危重病症、顽病痼疾、疑难病症显示出独特疗效,尽管乌头类中药为大辛大热大毒之品,毒性强,但还是为临床常用[6]。明代名医张景岳将附子与人参、熟地、大黄列为“药中四维”,可见其在中药中的重要性[7]

  乌头类中药主要含乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等双酯型二萜生物碱,既是毒性成分同时也具有显着的药理活性[8]。乌头类中药治疗剂量和中毒剂量之间差异较小,其生物碱含量与品种、制法有关[9]。2015 年版《中华人民共和国药典》规定制川乌含双酯型生物碱以乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的总量,不得过 0.040%[10]。蜜蜂采了乌头类植物的花蜜和花粉,所酿制的蜂蜜也有毒,进食这种蜂蜜一样可致中毒[11]。同时,民间食用乌头方式较多,有的直接泡酒、炖肉、水煮或油煎食用,还有的把乌头的嫩叶当野菜采食,因此,尽管,国家对乌头类中药按有毒药品进行了严格的管理,需经过炮制降低毒性后才能药用,但由于上述特点,常有因不合理的应用出现乌头中毒的事件报道[12]

  服用未经炮制的乌头 2g 即可致中毒或死亡,乌头碱口服0.2mg 即可出现毒性反应,3~4mg 即可致人身亡[13]。毒性反应对中枢神经系统和循环系统造成损害,对健康安全造成严重影响,常见毒性表现多样:消化系统主要表现为恶心、呕吐、流涎、腹痛、肠鸣、腹泻,严重者可出现大小便失禁[14];循环系统表现为面色苍白,唇青肢冷或大汗淋漓,心慌胸闷,心率缓慢或节律紊乱,血压下降以致休克如不及时治疗易引起死亡[15];神经系统轻者唇舌发麻,皮肤感觉先减退后消失,四肢麻木,烦躁不安,伴有头晕,头痛,重者全身发硬,四肢抽搐,语言及神志不清,呼吸先加快后减慢,直至休克[15]。上述所有症状的发生均不存在独立性,往往是相辅相成又或者是同时存在。

  心脏毒性是乌头类中药中毒最主要的毒性,双酯型二萜类生物碱通过过度兴奋迷走神经和直接损伤心肌细胞产生毒性。心律失常是典型、最主要的临床表现。双酯型二萜类生物使心肌细胞 Na +通道开放,Na+ 加速内流进入细胞质,并通过 Na+ -Ca2 + 交换,影响细胞内 Ca2 +稳态,促使细胞膜去极化,从而引起心律失常[13]。乌头碱也可通过阻断迷走神经、抗胆碱能作用、促进脂质过氧化等引起心律失常[14]。抑制呼吸酶的活性造成心肌细胞能量代谢障碍也是其致心脏毒性的重要环节[15]。目前国内外对乌头类中药心脏毒性的研究,大多局限于心肌细胞损伤及单个心肌细胞离子通道检测等方面,对心室肌细胞群毒性作用的分子毒理学机制,特别是对心肌细胞之间信息传递的影响机制、基因表达调控机制尚不明确[16]。伴随着现代研究技术的不断更新,对于分子毒理学的深入探讨慢慢进入研究者的学术范畴,对此,从毒性成分对心肌产生毒作用的蛋白组学调控机制等方面进一步深入已经成为了分子毒理学的热门研究方向。心律失常及神经系统损伤是乌头类中药的主要毒性反应, 其机制研究也较为清楚,但在文献研究中亦发现更广泛的中毒反应,如上消化道出血、广泛性出血、全血细胞减少、哮喘、 肾衰、蛋白尿等报道, 其中毒机制的研究中应引起重视[17]

  服用乌头类中药后,其成分在胃中已开始代谢,乌头类生物碱在胃部的代谢主要包括羟基化、脱氧、去甲基化等[18]。肠道内肠道菌群可分泌多种代谢酶,参与还原、水解、乙酰化等药物代谢[19]。乌头类生物碱在肠道的代谢与胃部的代谢基本相似。目前研究较深入地是乌头类生物碱在肝脏中的代谢。乌头生药中双酯型二萜类生物碱酯溶性高,可被迅速吸收,吸收分布在血液中的双酯型二萜类生物碱分子结构中C8-OH 乙酰化、C14-αOH 芳酰化,因而呈现强烈的毒性[20]。但可逐步酯解为毒性较低的单酯型二萜生物碱和毒性更低的醇胺型二萜生物碱,单酯型二萜生物碱和醇胺型二萜生物碱虽然毒性比双酯型二萜类生物碱低,但半衰期长,代谢产物经尿液和粪便排除体外[21]

  由于乌头类中药毒性强,治疗窗窄,中毒后尚无特效解毒剂,临床除立即停药,主要是依照中毒后患者表现的症状对症治疗,由于乌头主要是通过兴奋迷走神经而降低房结的律性,引起心律失常,临床上,使用皮下注射或肌肉注射阿托品,注射阿托品后,如果多发性室性早搏、和阵发性室性心动过速仍然存在,或有心源性脑缺血综合症时,用利多卡因、普鲁卡因酰胺、溴苄胺等[22]

  中医通过炮制和配伍实现对乌头类中药的“增效”“减毒”,防止中毒。

  乌头类中药炮制方法众多,多使用浸泡后蒸或煎煮法,辅料常用选用甘草、金银花、皂角、黑豆、豆腐、生姜[23]。《中华人民共和国药典》2015 年版炮制方法中无辅料,主要工艺步骤为加水浸泡后水煮(蒸)至取大个或实心者切开内无白心[24]。经加热 (煎煮) 可使毒性成分乌头碱分解成毒性较低的乌头次碱和毒性很小的乌头原碱,新的炮制方法,如:固体发酵技术、微波法、加压蒸汽炮制法也可达到减毒效果,用高压蒸制法,不经水浸泡,温度120℃, 每平方厘米 1.5kg 的气压蒸制2 小时,可达到降低乌头毒性,保持药效要求[25]

  乌头类中药的传统炮制多采用黑豆、醋、姜、甘草等辅料[26]。黑豆、甘草炮制可显着影响双酯型二萜生物碱的转换。是否与黑豆、甘草中黄酮类化合物有关需要进一步研究。

  乌头与黑豆、人参、干姜、甘草、大黄、白芍等配伍,均人减毒作用[27]。如配伍大黄,大黄中酸性的蒽醌类成分与乌头生物碱类成分形成酸碱对,在合煎时形成沉,导致乌头生物碱类成分提取量减少[28]。甘草与乌头合煎时,乌头的药动学参数产生变化,半衰期缩,表观分布容积,毒性降低[29]。甘草苷与乌头碱配伍可以减轻乌头碱的毒性作用,这可能与甘草苷改善了乌头碱对心肌细胞钾、钙离子通道编码基因的异常表达有关[30]

  由于乌头特别是附子在强心、镇痛、抗肿瘤、调节免疫等方面的良好的作用。同时我国冠心病和脑卒中等心脑血管疾病呈逐年上升趋势,发病年龄提前[31]。因此,乌头类中药使用需求不断增加。《中华人民共和国药典》中收载了许多经典的处方,其中附子的出现率较高,五百种常用名方剂中约 13.2%的方剂包含附子,使用率位列第9。然而,困扰乌头类中药临床应用的关键依然是如何减毒增效。药典规定了乌头类中药毒性成分的量,但乌头碱等成分即是毒性成分也是有效成分,也有经典名方如干姜附子汤、四逆汤等处方中直接用生附子[32]。所以炮制后这类成分控制在什么范围直接影响疗效。过高引起中毒,过低可能无效。进一步研究乌头类中药减毒同时增效具有重要意义。

  湖北海棠( Malus hupehensis ( Pamp.) Rehd.) 为苹果属植物,列为蔷薇科,即可食用也可药用。湖北海棠作茶饮用历史悠久,因此又称茶海棠,是三峡地区夏季广为饮用的清凉饮料[33]。在土家族传统的茶品上,湖北海棠名列前茅,同时它也是土家族常用的药。2014 年批准为新食品原料。湖北海棠叶富含以根皮苷为主的黄酮类物质等物质[34-35],具有保肝护肝[36-37]、抗氧化[38]、降血糖[39]、抗病毒[40]等多种作用,已收载于《湖北省中药材标准》、《山东中药材标准》。

  土家族有“药王昏死茶露醒”的传说,该传说与“神农滴水得茶”的传说非常相似[41]。相传很久很久以前,武陵山区有一位名医,他不仅医术高明,药到病除,医德高尚,不分贵贱,有求必应,而且还能认识很多的药物,因此,土着先民都尊称他为“药王”或“药王菩萨”,一日,药王到山中采到一蔸草药,因口尝过量,中毒昏迷后倒在一棵茶树下。次日清晨,茶叶上的露水滴入了药王的口中,他便慢慢苏醒了,而且他的头发也变黑了,于是药王便给此草取名为“乌头”[42]。药王菩萨也就成了土家族发现乌头有毒、茶叶有解毒作用的第一人。有研究表明“药王昏死茶露醒”传说中的茶可能中海棠茶,既湖北海棠嫩叶[42]

  “药王昏死茶露醒”的传说明确说茶能解乌头之毒。同时,甘草无论是作辅料还是与乌头类中药配伍使用均具有解毒作用[43]。而湖北海棠、甘草均含有大量有黄酮类物质,因此,我们探讨湖北海棠对乌头中毒的影响,以期为乌头类中药的减毒增效及湖北海棠进一步深入利用提供依据。

(未完,点击下面章节继续查看)

相关文章

上一篇:巴西榥榥木药理学分析结论、参考文章及感谢语

下一篇:海棠对乌头急性毒性的解毒功效

点击按钮复制手机号

18930620780

将微信二维码保存到相册

打开微信扫一扫从相册识别

1.点击按钮复制QQ号

3008635932

2.打开QQ→添加好友/群

粘贴QQ号,加我为好友